L929 는 쥐 섬유세포계로, TNF-α와 TNF-β를 검출하는데 자주 사용된다. TNF 의 치료는 종종 세포 사멸과 사망을 초래하기 때문에 L929 세포는 면역 측정에 자주 사용된다. 그러나 L929 세포를 전염시키는 것은 매우 어렵다. 특히 지질체 기술에 기반한 시약 전염을 사용하는 것은 매우 어렵다. 우리는 GenJet Ver 와 PolyJet 으로 L929 세포를 감염시켜 75% 의 형질 감염 효율을 얻었다. 간단한 실험 단계는 다음과 같습니다.
1. 전염시 L929 세포의 융합도가 80% 에 달하고 세포가 건강해야 하며 9 대를 넘지 않아야 한다.
2. 6 오리피스 판의 경우 1.0μg DNA 및 3.0μl Genjet Verⅱ 또는 PolyJet 형질 감염 시약 각각은 무 혈청 DMEM 으로 희석된다. DNA 에 희석된 감염제를 넣고 실온에 65438 05 분을 두어 전염복합물을 형성한다. 다른 세포 배양 용기는 표면적에 따라 DNA 함량을 조절할 수 있다.
형질 전환 복합체를 L929 세포에 직접 첨가한다. 혈청/항생제가 있을 경우 6 판 플레이트로 전염되는데, 각 판에는 1.0ml 배양기가 들어 있습니다.
4. 형질 감염 후 24~48 시간 동안 형질 감염 유전자의 발현을 감시한다.